Les résultats sont utilisés dans les tribunaux afin de fournir des niveaux quantitatifs du TA, ce qui en fait l’une des analyses les plus couramment pratiquées dans les laboratoires médico-légaux. Étant donné le grand nombre de prélèvements et l’exigence de rapidité dans le traitement des prélèvements, l’analyse doit être effectuée dans les plus brefs délais tout en offrant des résultats fiables et précis.
La consommation d’alcool peut sérieusement affecter la capacité à conduire un véhicule, le taux d’alcoolémie (TA) étant directement associé à cette altération de ses facultés. Un certain nombre de pays ont une tolérance zéro pour les automobilistes, mais la plupart d’entre eux autorisent un taux situé entre 50 et 80 mg d’alcool pour 100 ml de sang, soit entre 0,05 et 0,08 %. Les résultats sont utilisés dans les tribunaux afin de fournir des niveaux quantitatifs du TA, ce qui en fait l’une des analyses les plus couramment pratiquées dans les laboratoires médico-légaux. Étant donné le grand nombre de prélèvements et l’exigence de rapidité dans le traitement des prélèvements, l’analyse doit être effectuée dans les plus brefs délais tout en offrant des résultats fiables et précis.
L’espace de tête GC avec détection FID est généralement utilisé pour l’analyse du TA. L’espace de tête GC permet l’analyse quantitative de l’alcool directement à partir des prélèvements de sang. Les systèmes d’espace de tête standard utilisent de l’azote pour la pressurisation des flacons, l’hélium étant généralement utilisé en tant que gaz vecteur GC. Cette note d’application porte sur l’utilisation d’azote lors de la pressurisation des flacons et en tant que gaz vecteur GC. En tant que gaz vecteur, l’azote est une alternative abondante et économique à l’hélium tout en offrant des performances similaires. Nous comparons ici l’analyse de prélèvements de sang médico-légaux réels, prélevés sur des automobilistes soupçonnés de conduire sous l’influence de l’alcool, analysés en utilisant du gaz vecteur azote et du gaz vecteur hélium.
Préparation des prélèvements
À l’aide d’un Hamilton Microlab 600 Diluter, 200 μL d’étalons, de témoins ou de prélèvements de sang ont été aliquotés et distribués avec 2 000 μL de solution étalon interne dans un flacon d’espace de tête de 10 mL bouché. La solution interne est composée de 0,03 % (v/v) de n-propanol/1 M de sulfate d’ammonium/0,1 M d’hydrosulfite de sodium. Les solutions aqueuses d’éthanol traçables NIST de Cerilliant et Lipomed ont été utilisées en qualité d’étalons (10, 50, 80, 200, 300, 500 mg/dL) et de témoins (20, 80, 400 mg/dL), respectivement.
Expérience
Les analyses ont été effectuées en utilisant un Agilent 7890B GC avec injecteur avec/sans diviseur et deux colonnes toutes deux reliées à un détecteur FID. La division des prélèvements sur les colonnes a été effectuée via un diviseur à technologie de flux capillaire Agilent non purgé. Le GC a été associé à un prélèvement d’espace de tête Agilent 7697A. Pour tous les tests, le gaz de pressurisation des flacons a été fourni par un générateur Precision Nitrogen de Peak Scientific. Le gaz vecteur était fourni soit par une bouteille d’hélium, soit par le générateur Precision Nitrogen Standard. Les conditions de fonctionnement du système HS-GC-FID sont présentées dans le tableau 1.
| Échantillonneur d’espace de tête | Agilent 7697A |
| Gaz de pressurisation des flacons | Azote |
| Température du four | 70 |
| Température de la boucle | 70 |
| Ligne de transfert | Silice fondue désactivée, 0,53 mm id |
| Température de la ligne de transfert | 90 |
| Chromatographe en phase gazeuse | Agilent 7697A |
| Gaz vecteur | Hélium | Azote |
| Détecteur | FID |
| Colonnes | DB-ALC1 (30 m x 320 um x 1,8 um), DB-ALC2 (30 m x 320 um x 1,8 um) |
| Rapport de division | 10:1 |
| Température de départ du four GC | 40 °C (3 Min) |
| Taux de programme du four GC | 40 °C/min |
| Température finale du four GC | 120 °C (1,2) |
| Temps d’exécution de la méthode | 6,2 Minuten |
Les logiciels utilisés pour l’analyse étaient Agilent MassHunter GC/MS Acquisition et MSD ChemStation Enhanced Data Analysis E.02.02.1431.
Résultats
Les courbes d’étalonnage résultant du gaz vecteur hélium et du gaz vecteur azote ont toutes deux donné une très bonne linéarité, les deux courbes ayant des valeurs R2 s’élevant à 99,9999 (figure 1). Les taux d’alcool dans le sang ont été analysés sur cinq prélèvements de sang.
Figure 1. Les courbes d’étalonnage pour les étalons d’éthanol utilisent du gaz vecteur azote et du gaz vecteur hélium.
Les figures 2 et 3 présentent des chromatogrammes issus des colonnes DB-ALC1 et DB-ALC2, respectivement pour l’ordre de séparation et d’élution des substances à analyser dans le mélange de résolution multi-composants lorsqu’ils utilisent du gaz vecteur azote et du gaz vecteur hélium. La séparation des composants potentiellement interférents, tels que le méthanol et le 2-propanol, a été réalisée en 3 minutes quel que soit le gaz vecteur utilisé (figure 2 et figure 3).
Figure 2. Les résultats du mélange de résolution sont exploités sur la colonne DB-ALC1 en utilisant du gaz vecteur azote et du gaz vecteur hélium
Les résultats des analyses des prélèvements de sang réels (analysés en double) exploités avec du gaz vecteur azote et du gaz vecteur hélium sont équivalents, aucune différence n’ayant été révélée dans les concentrations d’éthanol calculées (tableau 2).
| Quantité d’éthanol détectée (%) | ||
| Azote | Hélium | |
| Prélèvement 1A | 0.05749 | 0.05702 |
| Prélèvement 1B | 0.05776 | 0.05689 |
| Prélèvement 2A | 0.01438 | 0.01421 |
| Prélèvement 2B | 0.01433 | 0.01417 |
| Prélèvement 3A | 0.23587 | 0.23476 |
| Prélèvement 3B | 0.23481 | 0.23323 |
| Prélèvement 4A | 0.02295 | 0.02254 |
| Prélèvement 4B | 0.02285 | 0.02255 |
| Prélèvement 5A | 0.05890 | 0.05866 |
| Prélèvement 5B | 0.05948 | 0.05867 |
Sur les cinq prélèvements de sang testés, un était supérieur à 0,2 %, ce qui se traduit par une interdiction de conduire dans la plupart des pays du monde. Deux prélèvements étaient supérieurs à 0,05 %, ce qui se traduit par une interdiction de conduire dans un certain nombre de pays. Les deux autres prélèvements étaient de 0,014 % et 0,023 %, ce qui serait inférieur à la limite autorisée dans la plupart des pays du monde.
Conclusions
Les résultats de l’analyse du TA montrent que quel que soit le gaz vecteur utilisé, qu’il s’agisse d’azote ou d’hélium, il n’existe pas de différence dans la linéarité de la courbe d’étalonnage ou dans la teneur en éthanol calculée dans les échantillons de sang réels.
L’hélium s’avérant de plus en plus cher, il n’y a aucune raison pour que l’azote ne puisse pas être utilisé à sa place en qualité d’alternative abondante et économique lors de l’analyse du TA. L’azote étant souvent utilisé pour la pressurisation des flacons dans les échantillonneurs d’espace de tête, l’utilisation d’une seule source de gaz pour la pressurisation des flacons, en qualité de gaz vecteur et en qualité de gaz d’appoint du FID simplifie l’approvisionnement en gaz du laboratoire et permettrait l’alimentation en gaz total des générateurs de gaz si le Precision Nitrogen était utilisé conjointement avec les générateurs Precision Hydrogen et Zero Air lors de l’analyse GC-FID.
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